微核試驗(yàn)方法原來(lái)是這樣的

　　微核試驗(yàn)是遺傳毒性研究的標(biāo)準(zhǔn)組合試驗(yàn)之一，廣泛應(yīng)用于食品、化工、藥品、農(nóng)藥、飲用水等多種產(chǎn)品的遺傳毒性評(píng)價(jià)。與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)相比，體外微核試驗(yàn)更簡(jiǎn)單快捷，避免了動(dòng)物個(gè)體差異的影響，靈敏度高。體外微核試驗(yàn)主要包括體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)、人外周血淋巴細(xì)胞微核試驗(yàn)、肝原代細(xì)胞微核試驗(yàn)等。

　　體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)是一種基因毒性試驗(yàn)方法，用于檢測(cè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞在處理后是否產(chǎn)生微核。本試驗(yàn)適用于檢測(cè)有絲分裂細(xì)胞在暴露于受試物期間或之后引起染色體斷裂和誘導(dǎo)非整倍體的能力。如果3H~6h短期治療的檢測(cè)結(jié)果為陰性或不確定，則需要進(jìn)行無(wú)代謝激活系統(tǒng)的長(zhǎng)期治療試驗(yàn)，相當(dāng)于受試物處理細(xì)胞1.5~2.0個(gè)正常細(xì)胞周期。

　　1、受試物

　　固體測(cè)試物質(zhì)應(yīng)溶解在合適的溶劑中并稀釋至合適的濃度。液體試驗(yàn)物質(zhì)可直接使用或稀釋至適當(dāng)濃度使用。供試品應(yīng)無(wú)菌并準(zhǔn)備使用，否則必須確認(rèn)儲(chǔ)存不會(huì)影響其穩(wěn)定性。

　　2、細(xì)胞

　　可選擇倉(cāng)鼠肺細(xì)胞系（V79、CHL）或卵巢細(xì)胞系（CHO）、小鼠淋巴瘤細(xì)胞系（L5178Y）、人外周血淋巴細(xì)胞系（如TK6）和原代培養(yǎng)細(xì)胞。推薦使用CHL細(xì)胞系或chl78l細(xì)胞系。細(xì)胞在使用前應(yīng)檢查染色體數(shù)目穩(wěn)定性和支原體污染。

　　3、測(cè)試方案的選擇

　　實(shí)驗(yàn)分為兩種方案：使用和不使用cytob。

　　方案一：

　　細(xì)胞用待測(cè)物質(zhì)處理后，在有絲分裂前使用cytob，然后觀察和分析完成有絲分裂的細(xì)胞（雙核細(xì)胞）的微核率。選擇人淋巴細(xì)胞時(shí)，推薦方案一，因?yàn)椴煌瑏?lái)源的細(xì)胞周期不同，并非所有細(xì)胞都對(duì)植物血凝素（PHA）有反應(yīng)。

　　方案二：

　　在沒(méi)有cyb的情況下，用受試物質(zhì)處理后觀察和分析細(xì)胞的微核率。如果有證據(jù)表明受試物干擾了cytob的活性，或cytob可能影響細(xì)胞的生長(zhǎng)（如小鼠淋巴瘤細(xì)胞系），推薦方案II。

　　4、劑量

　　至少應(yīng)設(shè)置3個(gè)試驗(yàn)劑量。當(dāng)供試物劑量至少為2～3時(shí)，可將最大劑量設(shè)定為最大劑量；當(dāng)存在細(xì)胞毒性時(shí)，劑量范圍應(yīng)為55%至5%細(xì)胞毒性至幾乎無(wú)細(xì)胞毒性。